不同前处理方法对猪组织中喹诺酮类兽药残留
喹诺酮类药物又称吡酮酸类或吡啶酮酸类，是人工合成的含4-喹诺酮基本结构的抗菌药。其主要以阻断DNA回旋酶，进一步造成细菌DNA的不可逆损害来达到抗菌效果。然而由于喹诺酮类药物有致癌、致畸、致突变的特点，滥用引发的环境危害和人类疾病风险成为目前的焦点，美国和欧盟都对喹诺酮类药物做出了相应的残留限量标准，我国农业部也已禁用洛美沙星（LOM）、培氟沙星（PEF）、OFL和NOR4种合成抗菌药，并且规定动物肌肉组织中恩诺沙星（ENR）、达氟沙星、氟甲喹（FLU）、沙拉沙星（SAR）、二氟沙星（DIF）、恶喹酸（OXO）的最高残留限量在10～μg/kg之间。因此，建立一种快速、便捷、高通量的方法对满足日益增长的监管需求具有重要意义。
动物源性食品具有基质复杂、干扰物质多、不易分离提纯等特点，因而前处理方法和质谱技术是影响兽药检测的关键。传统的样品前处理方法包括液液萃取（LLE）和固相萃取（SPE）等，近年来QuEChERS（quick,easy,cheap,effective,rugged,safe）法因其快速、便捷、有效等特点被由农药残留检测逐步应用于兽药残留检测领域。然而QuEChERS方法还有许多方面需要改进，目前QuEChERS方法主要应用于低脂肪食品中，因此寻找适合于高脂肪的吸附剂对于兽残检测来说尤为重要。
从目前文献来看，前处理方法种类繁多，应用于不同的质谱技术上有不同的结果，缺少对市售商业去脂产品的系统比较，不能很好地整合人力成本和时间成本。我国是猪养殖与消费大国，猪组织消耗量占世界总产量一半以上，因此开发建立猪组织中喹诺酮便捷可靠检测方法是保障猪组织质量安全的重要基础。基于此，南京财经大学食品科学与工程学院，江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心，江苏高校粮油质量安全控制及深加工重点实验室的王杰、裴斐、李彭等人选用OasisPRiMEHLB固相萃取柱以及EMR-L萃取盐包，以传统的乙腈一步提取、正己烷去脂的LLE法作为对照，结合不同的质谱平台系统综合地研究比较三者的差异，旨在探索“猪肉基质-前处理手段-质谱检测类型”之间的适用匹配关系，为拓展兽残检测方法、提升检测技术水平、保障食品安全，提供技术参考和理论依据。
1、基质提取物
OasisPRiMEHLB方法的净化效果明显优于以单一溶剂提取的LLE法，这是因为其亲脂性二乙烯苯和亲水性N-乙烯基吡咯烷酮聚合成的固相填料可以很好地吸附脂质。EMR-L方法处理样品中有少量盐类物质析出，这是由于EMR-L方法的盐析步骤中含有大量NaCl和MgSO4。
2、基质效应
绝大部分喹诺酮类兽药在3种基质和3种前处理方法中基质效应不明显，仅有CIP和CIN在LLE法中出现了较强的基质抑制效应。因此，为了获得更好的定量效果，本研究使用空白基质匹配标准曲线来抵消基质效应。
3、方法学验证
以定量离子峰面积（y）为纵坐标，质量浓度（x，μg/L）为横坐标作定量工作曲线，得到猪组织中线性回归方程的相关系数r分别为0.～0.（EMR-L）、0.～0.（OasisPRiMEHLB）、0.～1.（LLE），表明经过3种方法处理过的16种喹诺酮类药物在1.0～.0μg/L范围内线性关系良好。以3倍信噪比计算得到检出限分别为0.04～0.23（EMR-L）、0.08～0.41（OasisPRiMEHLB）、0.21～1.07μg/kg（LLE），10倍信噪比算得定量限分别为0.13～0.56（EMR-L）、0.27～1.36（OasisPRiMEHLB）、0.70～3.57μg/kg（LLE）。
4、Q-TOF/MS检测结果
EMR-L分别为85.67%、95.61%、98.99%，OasisPRiMEHLB分别为96.12%、87.69%、86.58%，LLE分别为73.29%、83.17%、70.26%。2种仪器的定量结果具有相似的趋势，由于Q-TOF/MS相对三重四极杆质谱灵敏度较低，其检测低限为1μg/kg，但仍满足我国所规定的最大残留限量10～μg/kg。这体现了Q-TOF/MS在拥有精确定性靶向目标物优势之余，同样可以满足对3种方法处理过的猪组织样品中喹诺酮类药物进行日常检测的需要。
5、实际样品检测结果
EMR-L、OasisPRiMEHLB、LLE和国标4种方法的检测结果分别为（16.3±0.49）、（16.8±0.35）、（15.4±0.91）μg/kg和（16.6±0.27）μg/kg。EMR-L和OasisPRiMEHLB方法测定结果与国标相近，表明这2种商业产品满足猪组织中喹诺酮类兽药残留的定性定量筛查。
结论
本研究统一采用酸化乙腈作为提取溶剂沉淀蛋白促进离子化效率，分别比较了以EMR-L为代表的QuEChERS法、以OasisPRiMEHLB为代表的固相萃取法和使用正己烷去脂的LLE法，结合当前检测常用的两类质谱：三重四极杆质谱和以Q-TOF/MS为代表的高分辨质谱。从净化结果来看，EMR-L与OasisPRiMEHLB净化去脂效果均优于LLE法，但EMR-L基质提取物因盐析脱水步骤导致盐含量较高，重复进样后离子信号强度有一定的降低，对仪器的具体影响有待进一步研究。从方法验证来看，3种方法的检出限、定量限及精密度满足残留分析要求。其中2种商业产品基质效应不明显，猪组织中加标回收率均在70%～%之间。从整体回收率看，EMR-L对于水分含量较高的猪肝、猪肾优于OasisPRiMEHLB；相对地，脂含量较高的猪肉中OasisPRiMEHLB重复性优于EMR-L。LLE方法所测样品中不在70%～%之间的比例约为12.5%。与现行国家标准及行业标准相比，EMR-L与OasisPRiMEHLB能够缩短操作时间、节省人力和时间成本。根据高分辨和低分辨质谱定性定量的不同，以及不同样品基质组成差异，选用上述2种方法相结合的方式进行处理检测，可以很好地避免假阳性结果的发生。本研究系统性将不同前处理方法结合不同检测手段引入猪组织的喹诺酮类兽药残留分析中，多角度评价了前处理方法对样品基质以及质谱检测的适用性，为当今环境中的食品安全监管提供了参考。
本文《不同前处理方法对猪组织中喹诺酮类兽药残留检测效果对比》来自于《食品科学》年39卷18期-页，作者：王杰，裴斐，李彭，白宇杰，方勇，杨文建，马宁，胡秋辉。DOI:10./spkx2--18047。点击下方阅读原文即可查看文章相关信息。
近期研究热点
干燥方式对白三叶多糖理化性质和抗氧化活性的影响
超高压对大豆球蛋白抗原性及结构的影响
干燥工艺对枇杷花茶感官品质的影响及其毒理学评价
高静压对木薯淀粉理化特性及结构的影响
饲养方式对苏尼特羊肠道菌群与脂肪酸代谢的影响
鲁氏酵母对米渣生酱油风味和抗氧化活性的增强效应
不同屠宰方式对新疆多浪羊肉品质的影响
丙烷丙硫代磺酸盐（PTSO）的免疫调节特性有助于其在实验性结肠炎中的肠道抗炎作用
基于鱼鳞贮藏方式改善鳙鱼鱼鳞明胶的功能特性应
我国东北大豆品种与豆腐加工特性分析
基于CR决策树的茶饮料用原料茶初筛方法
体外消化和贮藏条件对粗壮脉纹孢菌孢子中类胡萝卜素稳定性的影响
桂淮系列淮山淀粉性质的测定
自然发酵糯玉米中细菌多样性分析及纯菌种对其加工特性的影响亚硝化模拟体系中油脂对N-亚硝胺形成的影响
鲊广椒真菌多样性及其对滋味品质影响的评价
修改/编辑：袁艺；责任编辑：张睿梅
图片来源于百度图片
转载请注明：http://www.iparentsbook.com/sysc/6460.html
